- 當(dāng)前位置: 技術(shù)服務(wù) ->檢測技術(shù)->免疫組化
貴州吉創(chuàng)生物技術(shù)有限公司免疫組化實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1 細(xì)胞培養(yǎng):
1) 傳心肌細(xì)胞至24孔板:將細(xì)胞舊培養(yǎng)基抽出,加入2mlPBS洗2次,加入400μl 0.25% 膠原酶,37℃消化2min。
2) 加入完全培養(yǎng)基終止消化,吹打混勻,加入足量培養(yǎng)基,以500μl /孔向24孔板中加入細(xì)胞懸液(共傳6個孔),37℃繼續(xù)培養(yǎng) 。
2 實(shí)驗(yàn)操作:
1觀察:24孔板中細(xì)胞生長正常,培養(yǎng)基透明澄清,未見明顯微生物活動,覆蓋約50%
2 操作:細(xì)胞鑒定---TNNI3(Assay biotech B0588 )免疫組化檢測
1) 將24孔板舊培養(yǎng)基抽出,用PBS洗3遍,每次300μl。
2) 每孔加入300μl 4%多聚甲醛固定20min。
3) 棄掉多聚甲醛,PBS洗3遍,每次300μl,浸泡3min。
4) 使用康為世紀(jì)免疫組化染色試劑盒,貨號CW2035S。(說明書另附)
5) 試劑一,常溫孵育10min。
6)去掉試劑一加入PBS 洗三遍,加試劑二, 室溫孵育10min 甩干。
7)加入1:100的TNNI3抗體(PBS稀釋)4℃孵育過夜。
8) 抽掉抗體, PBS洗3遍,每次3min,
9) 加入試劑3 室溫孵育10min。
10) PBS洗3遍,每次3min。
11) 加入試劑四,室溫孵育10min。
12) PBS洗3遍,每次3min。
13)配置DAB染色劑,取1ml試劑B至1.5ml離心管中,滴加試劑A 2滴,漩渦打勻。
14) 在每孔加入顯色劑300μl,顯微鏡下觀察(顯紅色)。
15)結(jié)果如圖。
1 培養(yǎng):
1) 傳心肌細(xì)胞至24孔板:將細(xì)胞舊培養(yǎng)基抽出,加入2mlPBS洗2次,加入400μl 0.25% 膠原酶,37℃消化2min。
2) 加入完全培養(yǎng)基終止消化,吹打混勻,加入足量培養(yǎng)基,以500ul/孔向24孔板中加入細(xì)胞懸液(共傳6個孔),37℃繼續(xù)培養(yǎng) 。
2 實(shí)驗(yàn)操作:
1觀察:24孔板中細(xì)胞生長正常,培養(yǎng)基透明澄清,未見明顯微生物活動,覆蓋約50%
2 操作:細(xì)胞鑒定---α-Actin(Proteintech 23660-1-AP)免疫組化檢測
1) 將24孔板舊培養(yǎng)基抽出,用PBS洗3遍,每次300ul。
2) 每孔加入300μl 4%多聚甲醛固定20min。
3) 棄掉多聚甲醛,PBS洗3遍,每次300μl,浸泡3min。
4) 使用康為世紀(jì)免疫組化染色試劑盒,貨號CW2035S。(說明書另附)
5) 試劑一,常溫孵育10min。
6)去掉試劑一加入PBS 洗三遍,加試劑二, 室溫孵育10min 甩干。
7)加入1:100的TNNI3抗體(PBS稀釋)4℃孵育過夜。
8) 抽掉抗體, PBS洗3遍,每次3min,
9) 加入試劑3 室溫孵育10min。
10) PBS洗3遍,每次3min。
11) 加入試劑四,室溫孵育10min。
12) PBS洗3遍,每次3min。
13)配置DAB染色劑,取1ml試劑B至1.5ml離心管中,滴加試劑A 2滴,漩渦打勻。
14) 在每孔加入顯色劑300ul,顯微鏡下觀察(顯紅色)。
15)結(jié)果如圖。
結(jié)果該細(xì)胞大部分被染成紅色,說明該細(xì)胞中含有α-Actin抗體。
本文鏈接: http://tv999.com.cn/news/8043.html