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EXPERIMENT

蛋白實驗檢測

(一) WESTERN BLOTTING檢測

蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色， 再通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

METHOD

實驗方法

SHOW

實驗結(jié)果展示

INSTRUCTIONS

實驗服務(wù)說明

(二) ELISA檢測

酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay（簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上， 利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。

METHOD

分類方法

A、定性測定

定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。 "陽性"表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強度， 其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應(yīng)的最高稀釋度即為滴度。 根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

在間接法和夾心法ELISA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。

B、定量測定

ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用 一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬， 曲線最高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)值，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接， 所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。測定小分子量物質(zhì)常用競爭法， 其標準曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線注意圖中 橫坐標為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。

(三) TUNEL法檢測細胞凋亡

細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測， 可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素?(FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測， 這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。