1、取材
根據(jù)要求選取材料來源及部位,材料必須新鮮,擱置時間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性,導(dǎo)致細胞自溶及細菌的滋生,而不能反映組織活體時的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
2、固定
用適當?shù)幕瘜W(xué)藥液——固定液浸漬切成小塊的新鮮材料,迅速凝固或沉淀細胞和組織中的物質(zhì)成分、終止細胞的一切代謝過程、防止細胞自溶或組織變化,盡可能保持其活體時的結(jié)構(gòu)。固定能使組織硬化,有利于切片的進行,而且也有媒浸作用,
有利于組織著色。10%福爾馬林(4%多聚甲醛)或10%磷酸緩沖福爾馬林(10%的中性甲醛)是病理切片常規(guī)使用的固定液。
3、石蠟包埋
使石蠟浸入組織而起支持作用,再用光亮且厚的紙折疊成紙盒或金屬進行包埋。
4、切片
包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺,再用切片機切成厚度為4~7微米的切片。
5、HE染色
蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(曙紅,Eosin)染色法是組織學(xué)標本及病理切片標本的常規(guī)染色,簡稱HE染色。經(jīng)HE染色后,細胞核被蘇木精染成紫藍色,多數(shù)細胞質(zhì)及非細胞成分被伊紅染成粉紅色。
6、吉姆薩染色
吉姆薩染液由天青,伊紅組成。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合,染成粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性,與堿性染料美藍或天青結(jié)合,染成紫藍色,稱為嗜堿性物質(zhì);
中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)。
7、免疫組化染色
應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)
抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進行定位、定性及相對定量的研究。
8、免疫熒光染色
免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,
在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。