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ELISA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用 一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA,標準曲線的范圍一般較寬, 曲線最高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)值,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接, 所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。測定小分子量物質常用競爭法, 其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線注意圖中 橫坐標為對數(shù)關系,這更有利于測定系統(tǒng)的表達。
細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測, 可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素?(FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測, 這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。