【貴陽生物實驗室】:HPLC常見峰形及異常情況
一、HPLC
全稱高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography),是一種快速的分離分析技術。HPLC具有高效、高速、高靈敏度、適用范圍廣和流動相選擇范圍廣等特點,因而發(fā)展迅速,并在醫(yī)藥、食品、化妝品和農藥等很多行業(yè)有著廣泛的應用。
二、HPLC峰形
可能的原因:
a. 未成功進樣,或樣品未溶解進溶劑中,或樣品分解變質或樣品濃度太低;
b. 儀器本身的問題:泵或者檢測器故障;
c. 流動相選擇不合適,如對于反相硅膠柱來說,若流動相極性太大,是沖不下來一些小極性的物質的,物質一直保留在柱子中,因而不出峰。
d. 檢測器不合適,如:有些產品沒有紫外吸收或者吸收很弱,但是檢測還使用了UV檢測器
2.平頭峰
可能的原因:
a. 樣品濃度過大或進樣體積太大,這個也是大多數(shù)原因
b. 檢測器設置不正確
可能的原因:
a. 流動相吸收本底值過高
b. 進樣過程中進入空氣
c. 樣品組分的吸收低于流動相
d. 配制樣品的溶劑與流動相不一致
4.肩峰
可能的原因:
a. 進樣量過大;樣品濃度過高
b. 保護柱或色譜柱柱頭堵塞
全稱高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography),是一種快速的分離分析技術。HPLC具有高效、高速、高靈敏度、適用范圍廣和流動相選擇范圍廣等特點,因而發(fā)展迅速,并在醫(yī)藥、食品、化妝品和農藥等很多行業(yè)有著廣泛的應用。
二、HPLC峰形
HPLC分析過程中,由于各種原因,經常會出現(xiàn)一些異常峰形,嚴重影響對結果的分析,給實驗人員帶來很大的困擾。下面介紹一些常見的峰形以及可能的原因:
1. 未出峰
可能的原因:
a. 未成功進樣,或樣品未溶解進溶劑中,或樣品分解變質或樣品濃度太低;
b. 儀器本身的問題:泵或者檢測器故障;
c. 流動相選擇不合適,如對于反相硅膠柱來說,若流動相極性太大,是沖不下來一些小極性的物質的,物質一直保留在柱子中,因而不出峰。
d. 檢測器不合適,如:有些產品沒有紫外吸收或者吸收很弱,但是檢測還使用了UV檢測器
2.平頭峰
可能的原因:
a. 樣品濃度過大或進樣體積太大,這個也是大多數(shù)原因
b. 檢測器設置不正確
可能的原因:
a. 流動相吸收本底值過高
b. 進樣過程中進入空氣
c. 樣品組分的吸收低于流動相
d. 配制樣品的溶劑與流動相不一致
4.肩峰
可能的原因:
a. 進樣量過大;樣品濃度過高
b. 保護柱或色譜柱柱頭堵塞
相關標簽:
HPLC
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